Содержание
Содержание
Введение3
І. Гигиенические требования к качеству питьевой воды…4
II. Методы улучшения качества питьевой воды..8
2.1. Химические методы обеззараживания воды…13
2.2. Физические методы обеззараживания воды18
2.3. Специальные методы улучшения качества воды19
Заключение.21
Список литературы…23
Выдержка из текста работы
Целью учебной практики является приобретение навыков работы в микробиологической лаборатории: отбор проб, проведение микробиологических исследований, приготовление сред, посевы материала, анализ полученных результатов.
1. Материалы и методы исследования.
1.1 Объекты исследования:
— питьевая вода из источников централизованного водоснабжения исследовалась на соответствие требованиям СанПиН 10-124 РБ 99[1]. Микробиологические показатели безопасности представлены в таблице 1;
питьевая вода из источников нецентрализованного водоснабжения на соответствие требованиям СанПиН № 105[2]. Микробиологические показатели безопасности представлены в таблице 2;
смывы с медицинского инструмента на соответствие требованиям гигиенического норматива №128[7]. Микробиологические показатели безопасности представлены в таблице 3;
вода из чаши бассейна на соответствие требованиям инструкции по применению «Методы санитарно-микробиологического контроля воды плавательных бассейнов [4]. Микробиологические показатели безопасности представлены в таблице 4.
Таблица 1 — Микробиологические показатели безопасности для питьевой воды из источников централизованного водоснабжения
Наименование показателяЕдиница измеренияНормативТермотолерантные колиформные бактерии 1)Число бактерий в 100 см3ОтсутствиеОбщие колиформные бактерии 1), 2)Число бактерий в 100 см3ОтсутствиеОбщее микробное число 2)Число образующих колонии бактерий в 1 см3Не более 50Колифаги 3)Число бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 100 см3ОтсутствиеСпоры сульфитредуцирующих клостридий 4)Число спор в 20 см3ОтсутствиеЦисты лямблий 3)Число цист в 50 дм3ОтсутствиеПримечания:
. При определении проводится трехкратное исследование по 100 см3 отобранной пробы воды.
. Превышение норматива не допускается в 95% проб, отбираемых в точках водоразбора наружной и внутренней водопроводной сети в течение 12 месяцев, при количестве исследуемых проб не менее 100 за год.
. Определение проводится в системах водоснабжения из поверхностных источников перед подачей воды в распределительную сеть
. Определение проводится при оценке эффективности технологии обработки воды.
Таблица 2 — Микробиологические показатели безопасности для питьевой воды из источников нецентрализованного водоснабжения
Наименование показателяЕдиница измеренияНормативТермотолерантные колиформные бактерииЧисло бактерий в 100 см3ОтсутствиеОбщие колиформные бактерииЧисло бактерий в 100 см3ОтсутствиеОбщее микробное число (при 37 0)Число образующих колонии бактерий в 1 см3Не более 100
Таблица 3 — Показатели микробиологической чистоты изделий медицинского назначения, медицинской техники и материалов, применяемых для их изготовления
предназначенных для контакта со слизистыми оболочками, для контакта с кожными покровами вокруг губ и глаз, интимной зоныпредназначенных для контакта с кожными покровамиEnterobacteriacea, в 10 гне допускаютсяне допускаютсяS. aureus, в 10 гне допускаютсяне допускаютсяP. aeruginosa, в 10 гне допускаютсяне допускаютсяСуммарное количество бактерий, КОЕ/г102103Суммарное количество дрожжевых и плесневых грибов, КОЕ/г0102
Таблица 4 — Гигиенические нормативы качества воды в чаше бассейна
ПоказателиГигиенические нормативыобщие колиформные бактерииНе должны обнаруживатьсятермотолерантные колиформные бактерииНе должны обнаруживатьсяколифаги (число бляшкообразующих единиц)Не более 2лецитиназоположительные стафилококкиНе должны обнаруживатьсяДополнительные микробиологические и паразитологические показатели:возбудители инфекционных заболеваний (в 1000 мл)Не должны обнаруживатьсясинегнойные палочки (в 1000 мл)Не должны обнаруживатьсяцисты лямблийНе должны обнаруживатьсяяйца и личинки гельминтов (в 50 л)Не должны обнаруживаться
1.2 Отбор проб
1.2.1 Отбор проб питьевой воды
Отбор проб проводят в соответствии с методическими указаниями МУК РБ №11-10-1-2002 [4].
Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкость многократного применения, оснащенную плотно закрывающейся пробкой и защитным колпачком, изготовленную из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов и выдерживающих стерилизацию сухим жаром или автоклавированием.
При отборе проб в одной и той же точке для различных целей первыми отбирают пробы для микробиологических исследований.
Пробу отбирают в стерильные емкости. Емкость открывают непосредственно перед отбором (пробку удаляют вместе со стерильным колпачком). Во время отбора пробка и края емкости не должны касаться окружающих предметов. Ополаскивать посуду запрещается.
Отбор проб из крана производят после предварительного обжигания и последующего спуска воды не менее 10 мин при полностью открытом кране. При отборе пробы напор воды может быть уменьшен. Пробу отбирают непосредственно из крана, без резиновых шлангов, водораспределительных сеток и других насадок. Если через пробоотборный кран происходит постоянный излив воды, отбор проб производят без предварительного обжига, изменения напора воды и существующей конструкции (не снимая силиконовые или резиновые шланги).
При заполнении емкостей должно оставаться пространство между пробкой и поверхностью воды (пробка не должна смачиваться при транспортировании); после наполнения емкость закрывается стерильной пробкой (силиконовой, резиновой или из других материалов) и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги).
Отобранную пробу маркируют и сопровождают документом с указанием места, даты, времени отбора, фамилии специалиста, отбиравшего пробу и другой информации.
Доставку проб осуществляют в контейнерах-холодильниках при температуре +4-10 °С. При соблюдении указанного условия срок начала исследования от момента обора не должен превышать 6 ч. Если пробы нельзя охладить, их анализ следует провести в течение 2 ч после отбора.
Перед посевом пробу тщательно перемешивают, край емкости фламбируют.
1.2.2 Отбор проб с медицинского инструмента на стерильность
Отбор проб проводится в соответствии с Инструкцией 4.2.10-22-1-2006 [8].
Отбор проб на стерильность проводит уполномоченный представитель органа государственного санитарного надзора или обученный медицинский персонал организаций здравоохранения в стерильные емкости с соблюдением правил асептики непосредственно перед проведением манипуляций и операций.
Взятие смывов производят стерильным ватным тампоном на палочках, вмонтированных в пробирки или марлевыми салфетками, размером 5х5 см, простерилизованными в бумажных пакетах или в чашках Петри. Для увлажнения тампонов в пробирки с тампонами наливают по 5,0 мл стерильного раствора нейтрализатора. При применении дезинфектантов, содержащих хлор или перекись водорода, в качестве увлажняющей жидкости следует использовать раствор нейтрализатора (1% пептонная вода + 3% ТВИН-80 + 0,5% тиосульфата натрия), при применении других — 1% пептонная вода + 3% ТВИН-80 + 0,3% лецитина. При использовании салфеток стерильный раствор нейтрализатора разливают в стерильные флаконы по 5,0 мл. Салфетку захватывают стерильным пинцетом, увлажняют нейтрализатором и, после протирания исследуемого объекта, помещают во флакон.
При контроле мелких предметов смывы забирают с поверхности всего предмета; при контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого предмета площадью примерно в 100-200 см2.
1.2.3 Отбор проб воды из чаши бассейна
Отбор проб проводят в соответствии с методическими указаниями МУК РБ №11-10-1-2002 [4].
В ванне плавательного бассейна отбор проб воды на анализ производят не менее чем в двух точках в мелкой и глубокой частях ванны бассейна на глубине 25-30 см от поверхности зеркала воды в отдельную емкость. Перед исследованием готовят объединенную пробу из равных объемов воды.
1.3 Питательные среды
1.3.1 Среда Эндо
Использовали для идентификации бактерий группы кишечной палочки.
сухой препарат среды Эндо 40 г
вода дистиллированная 1000 г
фуксин (10%) 1,6мл
розоловая кислота 2 мл
Приготовление:
Готовят из сухого препарата по способу, указанному на этикетке. Если на поверхности среды заметны следы влаги, то чашки перед посевом подсушивают. Срок хранения чашек со средой не более 2-3 сут в темноте, если производителем не оговорены другие сроки. Для повышения дифференцирующих свойств среды в готовую и охлажденную до 60-70 °С среду перед розливом в чашки прибавляют на 100 мл среды 0,2 мл 5%-го спиртового раствора основного фуксина. Срок хранения раствора фуксина — не более 1 мес. В случаях, когда мембранные фильтры зарастают микрофлорой, не относящейся к бактериям кишечной группы, помимо фуксина добавляют на 100 мл среды Эндо 0,2 мл 5%-го спиртового раствора розоловой кислоты. Срок хранения раствора розоловой кислоты — не более 1 мес.
Модификацию среды Эндо с добавлением розоловой кислоты используют только при работе методом мембранной фильтрации.
1.3.2Лактозопептонная среда
Использовали для предварительного теста на присутствие колиформных бактерий, в частности E. сoli.
Состав:
вода дистиллированная 1000 г
пептон 10 г
натрий хлористый 5,0 г
лактоза 5,0 г
Приготовление:
Растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды 10 г пептона, 5,0 г натрия хлористого, 5,0 г лактозы. После растворения ингредиентов устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 мл в пробирки, стерилизуют при 112±2 °С 12 мин. Для приготовления концентрированной лактозопептонной среды все ингредиенты, кроме воды, увеличивают в 10 раз, разливают по 1 мл в пробирки и по 10 мл во флаконы.
1.3.2 Питательный агар
Использовали для предварительного теста на присутствие колиформных бактерий, в частности E. сoli.
Готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке. Питательный агар для определения колифагов готовят прямым методом, увеличивая навеску сухого препарата в 2 раза от прописи. Питательный агар запрещается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.
1.3.3 Полужидкий питательный агар
Состав:
вода дистиллированная 1000 г
сухой питательный бульон 15 г
агар микробиологический 3г
Приготовление:
г сухого питательного бульона и 3 г агара микробиологического растворяют при нагревании в 1 л дистиллированной воды. Доводят рН до 7,0-7,2, разливают в пробирки и стерилизуют автоклавированием при 121 °С в течение 15 мин. Питательный агар со стрептомицином готовят из расчета содержания 100 мкг стрептомицина на 1 мл питательного агара, приготовленного по стандартной прописи. Стерильно на стерильной дистиллированной воде готовят раствор стрептомицина в концентрации 10 мг на 1 мл. В готовый питательный агар, отмеренный по объему и остуженный до температуры 45-49 °С, вносят приготовленный стерильный раствор стрептомицина из расчета 0,1 мл на 10 мл питательного агара. Разливают в пробирки для приготовления скошенного агара. Повторное расплавление питательной среды со стрептомицином запрещается.
1.3.4 Желточно-солевой агар
мясо-пептонный агар 1 л
хлористый натрий 95 г
яично-желточная эмульсия 100 мл
Приготовление:
л мясо-пептонного агара перед анализом расплавляют и растворяют в нем 95 г хлористого натрия, охлаждают до температуры 45±1 °С и добавляют 100 мл яично-желточной эмульсии. Смесь тщательно перемешивают и разливают в чашки Петри. Хранят при температуре +4…-10 °С не более 5 сут.
1.3.5 Эмульсия яично-желточная
куриное яйцо протирают ватой, смоченной этиловым спиртом, помещают в стерильную чашку Петри, стерильным инструментом пробивают с противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно отверстие полностью удаляют белок, затем, увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу с 50 мл физиологического раствора, содержимое встряхивают до однородной массы. Хранят при температуре +4…- 10 °С не более 72 ч.
1.3.6 Агар Байрд-Паркер
Состав:
основы среды 90 мл
яично-желточная эмульсия 5 мл
раствор глицина (200 г/л) 6,3 мл
раствор пирувата натрия (200 г/л) 5мл
раствор теллурита калия (10 г/л) 1 мл
Приготовление:
К 90 мл основы среды добавляют асептически 5 мл яично-желточной эмульсии (см. выше «желточно-солевой агар») и стерилизованные фильтрованием через мембранный фильтр растворы: 6,3 мл раствора глицина концентрации 200 г/л, 5 мл раствора пирувата натрия концентрации 200 г/л и 1 мл раствора теллурита калия концентрации 10 г/л. Хранят при температуре +4…-10 °С не более 48 ч.
1.3.7 Маннитно-солевой агар
Состав:
вода дистиллированная 1000 г
пептон 10г
хлористый натрий 75г
маннит 10г
феноловый красный (1 %) 2,5 мл
Приготовление:
В 1 л дистиллированной воды вносят 10 г пептона ферментативного сухого, 75 г натрия хлористого, 10 г маннита. Все ингредиенты растворяют в воде, затем вносят 2,5 мл 1%-го раствора фенолового красного, тщательно перемешивают, устанавливают рН 7,6±0,2, кипятят в течение 1 мин, прибавляют агар микробиологический, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют при 121±1 °С в течение 15 мин. Хранят при температуре +4…-10 °С не более 14 сут.
1.3.8 Среда Гисса с маннитом и мальтозой
Готовят из сухого препарата промышленного производства в соответствии с указаниями на этикетке. Среды для обогащения бактерий вида Pseudomonas aeruginosa
1.3.9 Среда Хью-Лейфсона
Готовят из сухого препарата промышленного производства в соответствии с указаниями на этикетке.
1.3.10 Тиогликолевая среда
Состав:
гидролизат казеина (в пересчете на сухой остаток 15 г
дрожжевой экстракт (10% в пересчете на сухой остаток) 5 г
натрий хлорид 2,5 г
глюкоза 5 г
цистин 0,75 г
тиогликолевая кислота 0,3 мл
раствор резазурина 1:1000 свежеприготовленный 1 мл
агар-агар 0,75 г
вода дистиллированная 1000 мл
рН среды после стерилизации 7,0-7,2
Приготовление:
Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы и тиогликолевой кислоты.
Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве ди-стиллированной воды при постепенном добавлении 10-20% раствора NaOH до его полного растворения. Смесь подщелачивают 10% раствором NaOH до рН 8,0-8,2, кипятят, постоянно помешивая до расплавления агара (5-10 минут). Можно автоклавировать 20 минут при 1000С, затем прибав-ляют горячую воду до первоначального объема, прибавляют глюкозу и тиогликолевую кислоту, фильтруют, устанавливают рН 7,2-7,3. Добавляют раствор резазурина, смешивают и разливают в стерильные пробирки по 20 мл. Стерилизуют 20 минут при 1200С.
Допускается приготовление среды без раствора резазурина натрия.
Допускается применение других сортов агара, но с заранее вытитро-ванным количеством.
Тиогликолевую среду хранят до посева, предохраняя ее от света, при комнатной температуре не более 7 суток со дня приготовления.
1.3.10 Среда Сабуро
Состав:
сухой пептон ферментативный 10 г
глюкоза или мальтоза 100 г
вода дистиллированная 1000 г
рН среды после стерилизации 5,5-5,8
Приготовление:
В воду добавляют пептон, кипятят 10 минут и фильтруют. К полученному объему после фильтрации добавляют глюкозу или мальтозу. Если рН выше, чем 5,7, нужно подкислить 5% раствором HCl до рН 5,7.
Разливают в стерильные пробирки по 10 мл.
Стерилизуют при 1100С (0,5 кгс/кв. см — 30 минут).
Изотонический (0,85% -ный водный раствор хлорида натрия).
,85г хлористого натрия растворяют в 100см3 дистиллированной воды и стерилизуют при температуре 121 + 10С. Хранят при комнатной температуре не более 14 суток.
1.3.11 Бульон Хоттингера с 0,5% (1,0%) глюкозы
Состав:
мясной перевар по Хоттингеру до разведения аминного азота на 140-160 мг%
натрий хлористый 0,5%
глюкоза 0,5% (1,0%)
вода дистиллированная 7,2-7,4
Приготовление.
Смешивают мясной перевар по Хоттингеру с водой в таком соотношении, чтобы в среде содержалось 140-160 мг% аминного азота, добавляют хлористый натрий. Смесь подщелачивают 10% NaOH до рН 8,0-8,2, кипятят на открытом огне 10 минут или автоклавируют при 1000С 10 ми-нут. Если есть выкипание, доводят объем до первоначального кипяченой или дистиллированной водой. Фильтруют через ватный тампон, прибав-ляют 0,5% (1,0%) глюкозы, устанавливают рН 7,3-7,5 добавлением 5% HCl. Фильтруют и разливают в стерильную посуду.
Стерилизуют при 1100С в течение 30 минут.
1.4 Приготовление растворов и реактивов
Изотонический 0,85% раствор хлористого натрия (физиологический раствор). 0,85 г хлористого натрия: растворяют в 100 мл дистиллированной воды и стерилизуют при 121±1 °С в течение 15 мин. Хранят при комнатной температуре не более 14 сут.
Реактивы для проведения оксидазного теста:
Вариант 1: 1%-й водный раствор тетраметил-n-фенилендиамина гидрохлорида. Готовят перед употреблением.
